《表5 扩增引物信息：辛硫磷胁迫对异育银鲫细胞基因表达的影响》

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《辛硫磷胁迫对异育银鲫细胞基因表达的影响》

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以鲫鱼β-actin基因作为内参基因（该基因在试验条件下表达水平较稳定），选择至少在1个时间点有显著差异表达的基因进行实时荧光定量PCR，引物设计使用NCBI网站，引物合成由生工生物工程（上海）股份有限公司完成。反应每孔依次加入10μL TB Green （购自天根生化科技有限公司）、上下游引物各1μL、1μL c DNA模板和7μL dd H2O，每组设3个平行，PCR产物长度约为100～200 bp，Tm 60℃。反应条件：95℃预变性30 s，95℃，5 s，60℃，30 s，共进行40个循环。数据处理采用2-ΔΔCt方法表示各基因表达量（Livak and Schmittgen，2001），验证差异表达显著的基因（表5）。