《表4 检测PAL基因的定量引物Table 4 Quantitative primers for PAL genes detection》

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《加勒比松苯丙氨酸解氨酶活性及相关基因表达的种源间差异》

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m RNA的反转录，试验试剂为第一链c DNA合成试剂盒（Revert Aid premium reverse transcriptase），反应体系及流程为:取RNA 500 ng，Random Primerp（d N）6（100 pmol）1μL，d NTP Mix（0.5 mmol/L final concentration）1.0μL，加入Rnase-free dd H2O定容至14.5μL。轻轻混匀后离心3~5 s，反应混合物在65℃温浴5 min后，冰浴2 min，然后离心3~5 s。将试管冰浴，再加入下列试剂:4.0μL 5*RT Buffer，0.5μL Thermo Scientific Ribo Lock RNase Inhibitor（20 U），1.0μL Revert Aid Premium Reverse Transcriptase（200 U）。轻轻混匀后离心3~5 s，在PCR仪上按照下列条件进行反转录反应:（1）25℃孵育10 min；（2）c DNA合成50℃30 min；（3）终止反应85℃5 min，处理后，置于冰上放置。最后将上述溶液-20℃保存。引物设计，根据c DNA序列设计引物（表4），引物由生工生物工程有限公司合成。