《表2 不同保护剂溶解白色重组蛋白溶解率》

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《易发生聚集的重组HBcAg病毒样颗粒的纯化》

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将经凝胶过滤层析纯化的目的蛋白进行Sephadex G25凝胶层析柱脱盐，以PBS为流动相置换层析样品缓冲背景中的1mol/L尿素。然而，在置换掉1mol/L尿素后的目的蛋白静置后会有白色沉淀析出，同样经1mol/L尿素重悬超声沉淀的上清在脱尿素过程中就会有白色沉淀产生。我们推测由于尿素去除使VLPs再次聚集，SDS-PAGE也证实白色沉淀主要为目的蛋白（图4a）。因此我们利用文献中报道的一些生物制品及疫苗中常见的保护剂进行摸索，以此来寻找能够防止VLPs聚集的可临床应用的促溶剂。结果显示，山梨醇能够促进白色目的蛋白溶解，随着山梨醇浓度增高，溶解率也逐渐增高，而30%山梨醇使溶解率达到了74.2%（表2），SDS-PAGE显示的蛋白质含量与溶解率计算基本符合（图4b）。5%海藻糖虽然能够溶解部分白色沉淀，但是SDS-PAGE显示并没有目的重组蛋白存在。其余保护剂对白色沉淀溶解率较低，SDS-PAGE也显示没有目的重组蛋白存在（图4b）。基于以上结果，我们认为30%山梨醇是防止VLPs聚集的有效生物保护剂。