《表2 看护培养下不同时期的体细胞胚发生率》

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《刺槐体细胞胚发生的同步化调控》

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表中数据为每个时期统计3个培养皿中体细胞胚数目．

图6a-i显示了各发育阶段的同步化体细胞胚．将悬浮培养的胚性细胞用50目筛（孔径0.28mm）过滤，将留在筛上的细胞团接种到铺有滤纸的半固体体细胞胚诱导培养基上（图6g），培养基为MS+NAA 0.5mg/L+BA 0.5mg/L+MES 500mg/L+谷氨酰胺500mg/L+水解酪蛋白500mg/L+蔗糖30g/L+琼脂3g/L．培养7d后观察到细胞团的数量明显增多，14d左右可以发现有少量体细胞胚发生（图6h）．培养21d左右，球形胚大量发生（图6i），占到总胚状体数目的67.3%．在得到的胚状体中，有部分球形胚进入了鱼雷胚期和子叶胚期，但二者的数目仅占总胚数的20.4%和12.3%（表2）．随着总胚数的逐渐增加，球形胚数量逐渐减少，鱼雷期和子叶期的体细胞胚数量逐渐增加，但球形胚期的体细胞胚仍占主要地位．实验中没有观察到典型的大量心形胚的发生时期．这可能是由于心形胚的发育时期较短，不易观察．培养至28d时，总体细胞胚数的增加开始减缓，球形胚向鱼雷胚和子叶胚的转化也逐渐停滞，畸形胚的数量显著增加．分析原因可能与营养物供给不足有关．将培养21d的球形胚转接至新鲜的垫有滤纸的诱导培养基上继续培养能够有效降低畸形胚的发生比例，得到大量同步化的正常发育的体细胞胚．