《表1 去细胞化基质材料制备方法》

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《去细胞化基质材料修复椎间盘的研究与进展》

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目前，去细胞化材料的制备工艺主要包括物理、化学和酶学方法，其基本原理均是裂解细胞，去除细胞内容物，保留细胞外基质和天然构架。物理方法中最常用的是冲击，直接外力冲击可以裂解细胞[25]，也有尝试脉冲式电场破坏细胞膜裂解细胞[26]，但存在冲击损伤细胞外基质的弊端。冻融循环是另一种常用的物理方法，通过液体冷冻膨胀破坏细胞膜，导致细胞裂解[27]。化学方法通过化学试剂崩解细胞膜，将相关组织和器官脱细胞，获得器官特异性的细胞外基质[28]。常用试剂有Triton X-100、SDS、EDTA，其中SDS为离子洗涤剂，存在一定的细胞毒性[29]，并且会改变胶原微结构[30]；Triton X-100是非离子洗涤剂，通常和氢氧化铵合用，脱细胞的同时对组织结构的损伤小[31]；EDTA是一种可结合金属离子的螯合剂，常与其他脱细胞试剂联用，从而抑制细胞黏附于细胞外基质。酶裂解方法中的DNA酶能够有效裂解DNA片段，通常与脱氧胆酸钠联用[29]，可溶解细胞质和核膜；胰蛋白酶用于破坏细胞基质的黏附，常和EDTA联用，以减少盐溶性和酸溶性细胞外基质蛋白[32]；核酶（DNA酶和RNA酶）通过水解可以将抗原物质降到最低。实际应用中多联合以上方法制备椎间盘去细胞化组织工程支架，通过去除同种异体或异种细胞成分，理论上可利用这些细胞外基质制造出具备合适生物力学和生物特性的最低免疫原性支架，见表1。