《表2 PCR引物序列：去泛素化酶OTUD6A基因敲除小鼠的构建及表型初步分析》

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《去泛素化酶OTUD6A基因敲除小鼠的构建及表型初步分析》

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将F1代杂合子小鼠与Cre工具小鼠配繁，得到Flox区域删除且Cre阳性的F2代小鼠后，再和野生型背景鼠交配得到Flox区域删除且Cre阴性的F3代小鼠，待小鼠性成熟后利用雄性OTUD6A纯合敲除（OTUD6A-/-）小鼠和雌性OTUD6A杂合子（OTUD6A+/-）小鼠交配，并统计后代各基因型小鼠比例，后代有50%的概率得到去除Flox区域且Cre阴性的纯合子。提取小鼠尾尖基因组DNA为模版，通过PCR获取目的片段。反应体系：模板1μl、2×Taq Master Mix 12.5μl、上游引物（10μmol/L)1μl、下游引物（10μmol/L)1μl、ddH2O 9.5μl。反应程序：95℃变性5 min；98℃30s、65℃30 s（每个循环-0.5℃）、72℃45 s，循环20次；95℃30 s、55℃30 s（每个循环-0.5℃）、72℃45 s，循环20次；72℃延伸10 min。PCR引物序列见表2。PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳鉴定。