《表1 PCR引物序列：环丙沙星体外诱导肺炎链球菌耐药机制研究》

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《环丙沙星体外诱导肺炎链球菌耐药机制研究》

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引物设计参考Genbank已报道的肺炎链球菌gyrA/gyrB基因序列和parC/parE基因，具体见表1，委托中国上海Invitrogen公司合成引物。PCR总体积为100μl，内含2.5 mol/L各d NTP、250 nmol/L各引物、2.5 U Ex-Taq DNA聚合酶（TaKaRa）、5μl DNA提取物为模板、1×PCR缓冲液（p H值为8.3）。PCR参数:94℃4 min；94℃30 s，54℃30 s，72℃30 s，35个循环；72℃5 min。采用1μg/ml溴乙锭预染色的2.0%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。采用3S柱离心式琼脂糖DNA小量快速纯化试剂盒提纯PCR产物，委托上海Invitrogen测定PCR纯化产物各目的基因片段的核苷酸序列。参照GenBank已报道的肺炎链球菌目的基因核苷酸序列及推测的氨基酸序列进行比较，以确定上述10株临床菌株诱导前后gyrA/gyrB和parC/parE基因编码蛋白的氨基酸序列突变情况。