《表1 Real-time PCR所用引物》

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《DNMT3a通过提升基因内部甲基化介导紫杉醇诱导的LINE-1异常表达》

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收集约1×106个细胞，使用Trizol法（Invitrogen，美国）提取细胞全RNA，采用微量紫外分光光度计测定RNA浓度以及纯度（D260/280在1.8～2.0之间为宜），500 ng RNA使用逆转录试剂盒（南京诺唯赞生物科技有限公司）逆转录为cDNA。以cDNA为模版，使用SYBR Green I Master Mix（TaKaRa，日本）在Real-time PCR仪器上检测LINE-1 Orf-1和Orf-2mRNA的相对表达量。反应条件为：95℃10 min，95℃10 s，60℃30 s，72℃20 s；35个循环。采用2–ΔΔCt进行相对定量分析。所用引物序列见表1。