《表1 TRB增强Cip4启动转录作用的质粒分组》

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《基于荧光素酶双报告基因系统体外验证长爪沙鼠Cip4基因受RXR及T4调控》

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（1）质粒转染:（1）转染前一天24孔培养板中接种细胞，使转染时细胞密度在70%～80%，培养基为含1.3.2筛选出的工作浓度（0.01μmol/L）T4药物的DMEM+10%FBS（每个分组均包括含甲状腺素T4与不含甲状腺素T4，下同）；（2）2μL Lipo2000转染试剂稀释到50μL无血清DMEM培养基中，质粒稀释到50μL无血清DMEM培养基中（启动子+转录因子:TK=20∶1总质粒量2μg），混合室温孵育20 min，补无血清DMEM培养液100μL；（3）吸除皿中培养基，加入上一步制备的转染复合物200μL，37℃培养5 h；（4）吸除培养基，换0.5 m L含有1.3.2筛选出的工作浓度（0.01μmol/L）T4药物的完全培养基，37℃培养48 h；（5）转染做5次重复；（6）质粒转染组合:第一次转染分组如表1所示，其中pcDNA3.1、p GL3 basic为空载质粒，pRL-TK为提供海肾荧光素酶检测的内对照质粒，pGL3 basic-Cip4、pcDNA3.1-TRB分别是报告载体与TRB表达质粒，检测TRB对Cip4转录活性的影响。以上分组均包括含甲状腺素T4和不含T4两种处理，以检测T4的激动效果；第二次转染分组如表2所示，增加了pcDNA3.1-RXR表达质粒，第五组为检测RXR、TRB同时存在对Cip4转录活性的影响，其余同上（亦包括含甲状腺素T4和不含T4两种处理，以检测T4的激动效果）。