《表1 qRT-PCR引物》

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《叶面喷施丙三醇对烟叶碳氮代谢及硝酸盐积累的影响》

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根据Gen Bank中EGY1基因（Gene ID:833476）序列、CP12-2基因（Gene ID:825214）序列、PGK基因（Gene ID:107787830）序列、PPC16基因（Gene ID:547769）序列、GLPK基因（Gene ID:109221820）序列、SPS基因（Gene ID:107766133）序列、SUS2基因（Gene ID:109214879）序列、NIA1基因（Gene ID:107823732）序列、NLP7基因（Gene ID:828502）序列、NPF7.3基因（Gene ID:840139）序列，分别设计特异性引物，具体如表1。按反转录试剂盒说明书合成cDNA第一链，以cDNA为模板，按SYBR Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus）说明书进行qRT-PCR。反应体系含QuantiFast?SYBR?Green PCR Master Mix(2×）10μL、PCR Forward Primer(10μM×）0.2μL、PCR Reverse Primer(10μM×）0.2μL、Nuclease-free H2O0.4μL、cDNA模板1μL。反应程序为，95℃预变性10 min，95℃变性10 s，60℃退火及延伸30 s，40个循环，每个处理3次重复，每个反应3次重复。根据扩增曲线确定每个基因的响应Ct值，以L25为内参矫正PCR模板的拷贝数，采用2–ΔΔCt方法计算基因相对表达量。