《表1 定量PCR扩增体系》

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《移栽定殖根际有益菌番茄苗的田间效应研究》

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3)DNA的提取及测定。称取0.25 g土壤样品，用土壤DNA提取试剂盒（Mo Bio Laboratories，Inc.，Carlsbad，CA，USA），按操作说明提取土壤DNA。采用实时荧光定量PCR方法测定土壤样品中病原菌、总细菌、总真菌数量。病原菌扩增引物选用flic F（5’-GAACGCCAACGGTGCGAACT-3’）和flic R（5’-GG-CGGCCTTCAGGGAGGTC-3’）[29]；细菌扩增引物选用338F（5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’）和518R（5’-ATTACCGCGGCTG CTGG-3’）[30]；真菌扩增引物选用ITS1f（5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’）和5.8S（5’-CGCTGCGTTCTTCATCG-3’）[30]。定量使用仪器为ABI PRISM?7500 Real-time PCR system，反应体系见表1。反应程序为:95℃预变性30 s，95℃变性5s，53℃退火和延伸34 s（病原菌的退火和延伸温度为56℃），循环30次。每个样品设置3次重复，用无菌超纯水替代DNA模板设置阴性对照。根据样品阈值（Ct）计算每克土中的拷贝数，结果以拷贝数取对数后表示（log(Copies/g，以干物质量计）)。