《表1 沙棘不同发育期种子粒重和大小基因的qRT-PCR引物》

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《沙棘不同发育期种子粒重和大小基因表达的qRT-PCR分析》

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基于本研究团队前期构建的沙棘种子转录组数据库，获取调控种子大小和粒重目的基因的序列信息，应用PrimerQuest在线软件设计目的基因表达qRT-PCR分析的特异引物（表1）。依据大连宝生物公司的SYBR Premix Ex TaqTMⅡ（TliRNaseH Plus）试剂盒的方法，参考美国Applied Biosystems公司的ABI-7500 Real time PCR仪推荐的qRT-PCR程序，进行qRT-PCR实验。采用2-ΔCt方法分析目的基因的相对表达量（冯莹等，2016；魏小春等，2016），实验设3次生物学重复。PCR反应体系的总体积为20μL，包括10μL 2×SGExcel Fast SYBR Mixture，1μL正向引物（10μmol/L），1μL反向引物（10μmol/L），2μL cDNA和6μL RNase Free ddH2O。PCR反应程序为：预变性95℃、30 s；40个循环：95℃、5 s，60℃、34 s；溶解曲线：95℃、15 s；60℃、1 min；95℃、15 s。