《表3 荧光素酶报告实验的引物序列》

《表3 荧光素酶报告实验的引物序列》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《miR-193a-5p促进人胰腺癌细胞体外迁移和侵袭作用的研究》


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粗体代表酶切位点。

通过生物信息预测数据库TargetScan 7.1(http:/www.targetscan.org/)对miR-193a-5p进行检索,预测到Prox1为其靶基因。人工合成包含目的片段3′UTR种子序列Prox1野生型片段(Prox1-WT),并引入Xho?和Xba?限制性核酸内切酶位点;在野生序列基础上,另外设计合成了种子序列互补序列的突变位点,合成突变型片段(Prox1-Mut)(表3,粗体表示酶切位点)。包含目标基因的片段经退火后与酶切后的pMIR-REPORT质粒进行连接重组。将HEK-293T细胞种于24孔板中,每孔分别共转染1μg Prox1-WT(或相对应的突变质粒Prox1-Mut)、0.3μg海肾荧光素酶质粒以及相应量的miR-193a-5p模拟物或miR-193a-5p抑制剂或各自对应的阴性对照,每组设置3个平行复孔。转染48 h使用双荧光素酶报告试剂盒对其荧光值进行检测。