《表2 Gen Bank下载尖海龙Synghathus acus和舒氏海龙S.schlegeli序列信息》

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《尖海龙商品调查与《中国药典》中海龙的基原考证》


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取提取的基因组DNA,使用鱼类细胞色素C大亚基(COI)通用引物对Fish-F1(5'-TCAACCAACCACAAAGACA TTGGCAC-3')/Fish-R1(5'-TAGACTTCTGGGTGGCC AAAGAATCA-3')及引物对Fish-F2(5'-TCGACTAATCATAAA GATATCGGGAC-3')/Fish-R2(5'-ACTTCAGGGTGACCGAAGAATCAGAA-3')进行PCR扩增,PCR体系及PCR反应条件参考Ward等[3]的方法进行。取琼脂糖凝胶电泳阳性的扩增产物,由睿博兴科生物科技有限公司进行双向测序,序列经BioEdit软件拼接后使用DNAsp 5.0软件分析其单倍型,取各单倍型序列在NCBI数据库(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)和BOLD Systems v4数据库(http://v4.boldsystems.org/)中进行BLAST比对。另取海龙类序列,并从GenBank数据库中下载尖海龙S.acus和舒氏海龙S.schlegeli序列各10条(表2),经ClustalW比齐后使用MEGA 6.0软件进行系统发育分析并构建系统发育树,使用K2P法,bootstrap值设置为1 000。