《表1 OfSVP基因克隆引物序列》

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《桂花OfSVP响应环境低温对花芽分化的影响》

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参照RNAprep pure Plant Kit（天根，北京）试剂盒说明书提取总RNA，并参考Reverse Transcriptase M-MLV（TaKaRa，大连）反转录酶说明书合成cDNA。利用Premier5设计引物（表1）。PCR反应体系为Premix TaqTM 10μL，上、下游引物（10μmol·L-1）各1μL，cDNA 1μL，ddH2O补足至20μL。PCR扩增条件为:95℃5 min，95℃45 s，56℃30 s，72℃60 s，35个循环；72℃10 min。用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。利用DNA纯化/回收试剂盒（TaKaRa，大连）回收目的条带，与pMD18-T（TaKaRa，大连）载体16℃连接过夜，连接产物转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞，鉴定阳性克隆，送生工生物工程（上海）股份有限公司测序。