《表2 基因敲除所用sgRNA序列》

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《甘露醇磷酸化酶基因的敲除对D-甘露醇合成的影响》

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以菌株K-12为出发菌株，敲除甘露醇磷酸转移酶编码基因中的IIA、IIB和IIC元件cmtA、cmtB和甘露醇磷酸转移酶编码基因mtlA。构建用于基因敲除的质粒pGRB-sgRNA:将由华大公司合成的sgRNA片段（表2）与经反向PCR获得的pGRB质粒进行连接，利用热激法将重组质粒pGRB-sgRNA转入大肠杆菌DH5α，通过氨苄青霉素抗性平板筛选转化子。