《表1 肠道6种肠道细菌的引物序列》
⑴标本收集:留取观察组以及治疗组服药4周、8周、12周前后新鲜粪便标本(200mg以上)于无菌冻存管中,放入-80℃冰箱保存备用。⑵制备肠道细菌DNA:取约300mg粪便标本,通过QIAamp DNA Stool Mini Kit试剂盒(源自德国Qiagen公司)提取肠道细菌DNA,进行浓度测定后于-80℃冰箱内保存备用。⑶PCR引物设计与合成:参照相关文献及研究[2],根据双歧杆菌、乳酸杆菌、肠球菌、大肠埃希菌、葡萄球菌及产气荚膜梭菌等肠道菌群的16 SrDNA全序列设计引物,验证引物特异性后进行合成,具体引物详见表1。⑷荧光定量PCR反应:采用25μl SYBR Green反应体系,经过多次优化后,确定各细菌反应程序后进行荧光定量PCR反应。⑸细菌数量的获取:制作各细菌标准曲线后,将待测细菌样品与标准曲线进行比较,获得6种细菌数量。细菌数量采用log拷贝数/湿便重(g)表示。
图表编号 | XD0068213200 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.05.20 |
作者 | 李青、胡瑞钺 |
绘制单位 | 江西省人民医院、江西省人民医院 |
更多格式 | 高清、无水印(增值服务) |