《表2 不同甘露糖筛选压对转化的影响》

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《以PMI为选择标记基因的雪柑遗传转化体系的优化》

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注:邓肯氏新复极差测验，不同字母表示差异达极显著水平（P=0.01）Note:Different letters mean significantly different at the 0.01 level by Duncan’s multiple range test

在以PMI基因为选择标记的遗传转化体系中，必须以甘露糖作为筛选剂。而雪柑上胚轴不定芽的诱导不能以甘露糖作为碳源[2]，所以在SMS中设置了甘露糖和蔗糖的不同浓度梯度。从表2可以看出，在SMS培养基中加入不同浓度的蔗糖后，抗性外植体的分化率会比单纯加入甘露糖的培养基分化率要高，但这样也同时增加了假阳性芽苗的比例。在20 g/L甘露糖+10 g/L蔗糖和25 g/L甘露糖+5 g/L蔗糖2个浓度梯度时，外植体纵切面上出现大量的愈伤组织，随后在愈伤组织的表面形成芽，不过这些芽大多都有玻璃化现象；这些玻璃化的芽在以后的壮苗筛选中会黄化死亡，很难生长为健壮单株。而在SMS培养基中单纯加入30 g/L甘露糖，比单纯加入20 g/L甘露糖时抗性外植体的分化率有明显降低，这样就减少了对阳性芽苗的筛选力度。所以在雪柑上胚轴转化时，筛选培养基SMS中适合的甘露糖浓度为20 g/L（图3）。