《表1 qPCR引物序列：低剂量镉对雌性斑马鱼卵子发生的影响》

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《低剂量镉对雌性斑马鱼卵子发生的影响》

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依照RNAiso Plus试剂盒操作指南分别提取实验鱼脑和卵巢的总RNA。总RNA的完整性通过琼脂糖凝胶电泳检测，总RNA的浓度及OD260/OD280值用微量分光光度计（Nanodrop ND-2000）测定。以提取的总RNA为模板，采用PrimeScript?RT试剂盒（TaKaRa）将之反转录成cDNA。取1μL cDNA（稀释10倍）在CFX96实时定量PCR仪（Bio-Rad）上使用SYBR Premix Ex TaqTM试剂盒（TaKaRa）进行实时荧光定量PCR分析，反应总体积为10μL，其中包含1μL cDNA、0.4μL正向/反向引物、3.2μL双蒸水和5μL SYBR Premix Ex TaqTM，扩增条件为：95℃预变性30s，40个循环的95℃变性5s、60℃退火30s和72℃延伸30s。基因的相对表达量参照Livak等人[13]的方法计算，所有基因引物序列详见表1，选择ef1α作为内参基因。