《表2 ITS2通用引物和特定铁皮石斛ITS2鉴定引物》

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《基于ITS2序列和特定引物区分铁皮石斛和伪品的PCR鉴别方法》

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铁皮石斛ITS2序列通用引物，由上海英伟捷基有限公司合成。PCR反应在20μL的体系，每个反应体系中包括40 ng基因组DNA，2 mmol/L Mg Cl2，0.2 mmol/L d NTPs，1U的Taq DNA聚合酶，10 mmol/L This-HCl，以及各0.5μmol/L的正向和反向引物。PCR反应在IQ5热循环仪中进行。PCR反应参数:96℃预变性3 min，96℃变性45 s，58℃退火45 s，72℃延伸60 s，40个循环。72℃延伸10 min，反应结束后，产物置4℃保存。扩增得到核糖体DNA的ITS2片段（包括ITS2，5.8S r DNA、26r DNA和ITS2）。 （见表2）