《表1 微卫星引物列表:凡纳滨对虾八个地理群体遗传多样性的微卫星分析》

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《凡纳滨对虾八个地理群体遗传多样性的微卫星分析》


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从已报道的文献和NCBI数据库(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)中获取凡纳滨对虾的微卫星序列,用SSRHunter软件查找其中包含的微卫星位点,采用Primer 5.0设计软件对所筛选出的SSR序列设计引物,进行PCR扩增,调整引物退火温度(引物送至上海生工合成).PCR采用20μL体系,包括:DNA模板(1μL),正反引物各(0.8μL),dd H2O(7.4μL),2×Taq Mix(10μL).PCR扩增的反应程序:95°C预变性5 min;32个循环,每个循环包括94°C变性30 s,退火30 s,72°C延伸30 s;72°C延伸5 min,4°C保存.凝胶检测扩增产物,保存于4℃冰箱.利用凡纳滨对虾的24个个体对符合要求的SSR引物进行扩增,采用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳来验证多态性,从中筛选出多态性高的15个SSR位点(引物见表1).