《表3 不同培养基配方Table 3Formula of different media》

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《牛樟芝中一个新型还原型聚酮合酶基因的克隆及表达分析》

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项目组之前的研究表明，不同碳氮源及配方的培养基对牛樟芝生长速度有显著影响（赵能等，2016）。在前期研究结果的基础上，先选取适合牛樟芝菌丝体快速生长的1-11号培养基应用于Ac PKS2基因表达实验，具体配方见表3；再用商业培养基MEB（麦芽浸粉13 g·L-1）、PDA（马铃薯浸粉5 g·L-1，葡萄糖20 g·L-1）、WB（麦芽浸粉15 g·L-1，麦芽糖12.75 g·L-1）、SA（葡萄糖20g·L-1）和TMG（番茄浸粉10 g·L-1，麦芽糖5 g·L-1，葡萄糖10 g·L-1）验证其Ac PKS2基因的表达情况。按照所选的培养基配方配置，并接种牛樟芝菌丝体，置于25℃恒温培养箱中培养40 d后，从每种培养基上各获取0.5 g牛樟芝真菌菌丝体，重复3次取样，并依据真菌RNA提取试剂盒（康为世纪）的说明提取总RNA。牛樟芝总RNA参照反转录试剂盒（Transgen）说明书合成第一条链c DNA，并于-20℃冰箱保存备用。然后，以特异引物Tac PKS1F、Tac PKS1R（表1）检测生长于不同培养基上的牛樟芝Ac PKS2基因具体表达情况，进行琼脂糖凝胶电泳检测后，利用图像分析软件GENE-SNAPS分析其积分光密度，并进行相对定量表达分析。