《表1 q RT-PCR反应引物序列》

《表1 q RT-PCR反应引物序列》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《秀珍菇不同生长阶段在低温刺激后的转录组及差异基因表达分析》


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分别提取秀珍菇生长不同阶段总RNA,参考i Script c DNA Synthesis Kit进行c DNA第一链的合成,同时根据二代测序后拼接序列设计引物,按照SYBR Premix Ex Taq TMⅡ使用说明,分别检测2个相邻阶段差异最显著Unigene基因的表达情况:Unigene51871、Unigene27476、Unigene48764、Unigene22380、Unigene71162、Unigene32037、Unigene36538、Unigene33377、Unigene38510、Unigene36510、Unigene22231、Unigene51080,以GAPDH作为内参,计算相对表达量。PCR反应体系20μL,其中Taq酶10μL,上、下游引物各0.4μL,模板1μL,样品设3重复。反应条件:95℃预变性3min,95℃10 s,65℃40 s,40个循环。按照以下公式进行相对表达量计算:目的基因相对表达量=2-ΔΔCt,其中ΔCt=CtUnigene-Ct GAPDH(计算方法参考崔波等,2016)。引物见表1。