《表1 试验因素编码：‘红颜’草莓中果糖激酶基因FaFRK3的克隆与表达分析》

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《‘红颜’草莓中果糖激酶基因FaFRK3的克隆与表达分析》

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利用E.Z.N.A.Plant RNA试剂盒从‘红颜’草莓果实中提取RNA，利用Oligo软件进行Fa FRK3基因CDS引物（Fa FRK3-F和Fa FRK3-R）设计（表1），使用MLV反转录酶、RNase Inhibitor进行反转录，得到单链c DNA。PCR反应体系为:25μL 2×Es Taq Master Mix（Dye），上下游引物各2μL，1μL c DNA，加水至50μL体系。PCR反应程序:98℃预变性5 min；98℃变性30 s，62℃退火30 s，72℃延伸2 min，共30个循环，72℃延伸5 min。扩增后的PCR产物使用胶回收试剂盒回收得到Fa FRK3基因的目的片段，连接到p DONR221入门载体上[18]，重组载体转入TOP10大肠杆菌感受态细胞中，菌液检测呈阳性的单克隆送至上海生工生物工程股份有限公司进行测序。