《表1 外排泵基因引物序列》

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《痰热清注射液与抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌外排泵的作用》

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以PAOl为对照，MDR-PA外排泵基因mexAB，mexCD，mexEF，mexXY中至少有1个的表达水平是PAOl的2倍或2倍以上，即为外排泵表型阳性菌株。挑取外排泵阳性菌株至3 mL LB液体培养基中，37℃280 r·min-1增菌至对数期，12 000 r·min-1离心5 min收集菌体，trizol法提取RNA，经三氯甲烷，异丙醇，乙醇提纯，260/280法测定总RNA丰度。根据5×TRUE RT Master Mix试剂盒说明书逆转录为cDNA，采用2×SYBR Green Real-time PCR Mix染料法定量检测mexAB，mexCD，mexEF，mexXY mRNA表达量，以rpoD为内参基因。Real-time PCR条件为95℃预变性5 min，95℃变性15 s，60℃退火延伸30 s，循环40次。计算每个样本基因的3个复孔的平均Ct值，采用2-ΔΔCt法计算目的mRNA相对表达量。引物由北京中美泰和有限公司合成。引物序列见表1。