《表1 各基因qPCR引物序列》

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《胆红素对脂多糖引起的腹膜炎及腹腔免疫细胞功能的影响》


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使用RNAiso Plus试剂盒分别提取不同处理后腹膜巨噬细胞与Raw264.7细胞的总RNA。使用Prime ScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser试剂盒进行逆转录获取第一链c DNA,采用SYBR Premix Ex TaqⅡ试剂盒检测腹膜巨噬细胞与Raw264.7细胞中Nlrp3和IL-1βmRNA的表达,以β-actin作为内参基因。扩增体系:上下游引物各1μl、cDNA 2μl、SYBR Premix Ex TaqⅡ12.5μl、无酶水8.5μl。扩增条件:95℃5 min,95℃30 s,60℃30 s,40个循环。采用2-ΔΔCt法计算各目的基因mRNA表达水平。由上海吉玛公司设计并合成各个基因的引物,具体序列见表1。