《表1 用于PCR扩增的引物列表》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《中国卫氏并殖吸虫线粒体基因组及多地域株的系统发育分析》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

注：引物名称由上、下游引物所在位置的基因名组合而成：C3CY为扩增COX3至CYTB片段的引物；fnc为扩增前非编码区的引物；*用于LA PCR扩增长片段的引物

参照韩国地域株卫氏并殖吸虫线粒体基因组序列（GenBank登录号：NC＿002354.2），设计一批引物（表1），以保证其扩增片段可相互重叠，并覆盖线粒体全基因组序列。分别以两型并殖吸虫成虫DNA为模板，PCR扩增，体系如下：0.5μL DNA抽提液、5μL10×Ex Taq Buffer（Mg2+）、2μL上游和下游引物（10mmol/L）、4μL dNTP mixture（浓度均为2.5 mmol/L）、0.5μL TaKaRa Ex Taq DNA聚合酶（5 U/μL），ddH2O定容至50μL；长片段采用TaKaRa LA Taq试剂盒。反应条件如下：95℃2 min；95℃30 s，60℃30 s，72℃30 s，共35个循环；72℃10 min。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳鉴定条带大小，切取目标条带，通过DNA凝胶提取试剂盒（Axygen）纯化回收。将纯化后的DNA各片段分别克隆至pMD18-T载体，转化感受态DH5α细菌，并挑取多个阳性单克隆，经3730xl DNA Analyzer（上海生工）测序，获得各片段序列。在DNASTAR软件的Seqman程序中，将各DNA片段进行拼接，以获得各样本完整的线粒体基因组序列。同时，检测两个样本的ITS2基因序列以确认虫种。