《儿童恶性淋巴瘤Id4基因甲基化状态研究》

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主要技术内容:第一部分、基础实验体外培养人Burkitt’s淋巴瘤细胞株Raji细胞,用甲基化特异性聚合酶连反应(MS-PCR)法检测Raji细胞的Id4基因甲基化状态,并用不同浓度的As2O3处理Raji细胞。应用MTT比色法检测细胞生长情况;流式细胞术(FCM)分析As2O3对细胞周期的影响并检测细胞凋亡;MS-PCR法检测As2O3处理前后Id4基因甲基化程度改变,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测处理前后Id4基因mRNA的表达情况。第二部分、临床实验采取确诊为恶性淋巴瘤Ⅳ期(骨髓浸润)患儿治疗前及治疗过程中骨髓细胞标本作为研究组,非血液肿瘤患儿骨髓作为对照组,用MS-PCR法检测骨髓细胞的Id4基因甲基化状态,并在化疗过程中动态观察变化情况。技术经济指标:①发现Burkitt’s淋巴瘤细胞株Raji细胞Id4基因呈完全甲基化或部分甲基化,该基因表达消失。儿童恶性淋巴瘤(骨髓浸润)Ⅳ期骨髓细胞中Id4基因甲基化阳性率为64.3%,不同分型间(非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤)阳性率均无显著性差异。在治疗中动态观察,Id4基因高甲基化状态随着化疗病情的好转变化高甲基化状态也随之发生减少变化,复发时又重新出现,Id4基因甲基化为恶性淋巴瘤的病因之一。②Id4基因甲基化状态检测是一种灵敏的检测肿瘤细胞的方法,可作为临床检测儿童恶性淋巴瘤(骨髓浸润)Ⅳ期骨髓微小残留的一种新手段。③AS2O3可逆转Id4基因甲基化。为临床提供了治疗儿童恶性淋巴瘤的新靶点药物。④Id4基因去甲基化后人Raji细胞出现凋亡变化。⑤进一步提高了儿童恶性淋巴瘤的早期诊断率和治愈率,给社会带来较大经济效益、社会效益。应用推广及效益情况:相关结果已有7篇论文在国家级核心期刊发表。该项研究已在2012年获得河北省科技成果证书,成果号20103640。用甲基化特异性聚合酶连反应(MS-PCR)方法检测淋巴瘤Raji细胞和儿童恶性淋巴瘤(骨髓浸润)Ⅳ期骨髓细胞中Id4基因甲基化状态,对探索恶性淋巴瘤的发病机制,寻找治疗靶点及标记物具有较好的前景。AS2O3可逆转Id4基因甲基化状态,为临床提供治疗恶性淋巴瘤的新方法,对提高儿童恶性淋巴瘤治愈率有十分重要的意义和较高的经济效益和社会效益。该项检查技术已在省级两家医院应用,技术成熟,应用稳定。Id4基因甲基化状态检测是一种灵敏的检测肿瘤细胞的方法,可作为临床检测儿童恶性淋巴瘤骨髓微小残留的一种新手段。可推广应用在省、市、县级医院血液肿瘤患者骨髓检测,了解病因,观察疗效,判断预后。具有免疫和分子生物学基本实验条件的实验室均能完成实验。对改善恶性淋巴瘤患儿的预后和生活质量,提高儿童恶性淋巴瘤的治愈率有重要实用价值和社会意义。且临床操作简便,可行性高,易于推广,其临床应用前景十分光明。

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