《RNAi逆转淋巴瘤P-gp和LRP介导的多药耐药的研究》

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该项目是2008年度山东省自然科学基金项目第Y2008C75号课题,经过3年努力工作,完成计划书设计的研究任务,并顺利通过验收鉴定。本课题已指导并应用于临床,为逆转多药耐药(MDR)的研究开辟了崭新的途径。 恶性淋巴瘤是一种起源于淋巴造血组织的实体瘤。目前淋巴瘤的治疗主要是放疗和化疗。而化疗药物的应用导致肿瘤细胞中可同时表达多种耐药蛋白,容易导致肿瘤化疗的失败,如何能同时逆转多种耐药蛋白介导的多药耐药是解决问题的关键。目前,RNA干扰(RNAi)在逆转恶性淋巴瘤的多药耐药方面的研究成为当今的热点。一、主要技术内容:1、构建双靶向干扰P-糖蛋白(P-gp)和肺耐药蛋白(LRP)的载体。本实验在以前工作的基础上,克隆H1启动子至TA载体,将LRP基因干扰序列连接至H1启动子下游,将P-gp基因干扰序列连接至pSUPER载体,再将H1-LRP片段连接至pSUPER-Pgp上,构建双靶向干扰载体,将构建的双靶向干扰载体转染非霍奇金细胞BJAB,能逆转P-gp和LRP介导的MDR。2、采用细胞毒性试验、外排试验、荧光定量PCR、Western blot等方法观测双靶向干扰载体对P-gp和LRP介导的多药耐药的逆转作用。3、采用干扰质粒转染耐药淋巴瘤细胞BJAB后,细胞对阿霉素的耐药指数降低,细胞表达P-gp、LRP mRNA和相应蛋白显著降低。4、本研究表明构建的双靶向干扰载体能在体外逆转淋巴瘤细胞中P-gp和LRP介导的多药耐药。二、应用与评价:本课题验证了构建的双靶向干扰载体能在体外逆转淋巴瘤细胞中P-gp和LRP介导的非典型性多药耐药。经山东省肿瘤医院、潍坊医学院附属医院、潍坊市中医院及潍坊市第二人民医院多家医院应用证明,通过构建针对P-gp和LRP的双靶向干扰载体,并将载体转染至淋巴瘤细胞BJAB,逆转了肿瘤耐药蛋白的表达和耐药表型,达到逆转多药耐药的目的,为同时逆转多种机制介导的多药耐药的治疗提供了新的方法。山东省医药卫生科技信息研究所查新鉴定,国内外未见与本课题相同的建立双靶向干扰P-gp和LRP耐药蛋白的载体,并在体外逆转淋巴瘤细胞中P-gp和LRP介导的非典型性多药耐药的文献报道。本课题已在核心期刊发表论著8篇,其中2篇被SCI收录。

本课题获2012年潍坊市科学技术进步一等奖。

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