《新型法氏囊生物活性肽免疫生物学功能研究与应用》

一、该项目属于兽医传染病领域。

二、主要内容:

该成果通过采用噬菌体展示技术、多种动物免疫模型、免疫学和分子生物学的研究方法和手段,1)解析了法氏囊活性肽BS、BP5以及BPP-II与鸡B淋巴细胞的相互作用机制;2)以骨髓干细胞和未成熟B细胞为模型,利用基因组和蛋白质组分析,阐明了新法氏囊活性肽BP5、BPP-II和BSP-II调节B细胞分化的分子基础和作用机制;3)阐释了新法氏囊活性肽BP5抗氧化的分子机理,在此基础上通过动物免疫实验,证实了新型法氏囊生物活性肽BLP、BP5、BP-(I-IV)和BPP-(I-V)具有良好的免疫佐剂活性。该成果共授权国家发明专利6项,发表JCR 3区以上(SCI)论文5篇,JCR 4区(SCI)论文2篇,核心期刊论文1篇。该成果为新型免疫佐剂的开发和动物疫病的防控提供了很好的思路。同时对于保障河南养殖业的健康发展也有着重要的意义。

三、主要特点:

1.筛选法氏囊活性肽BS、BP5以及BPP-II特异性结合肽,确定法氏囊活性肽与细胞结合位点,以鸡DT40细胞为B淋巴细胞模型,利用T7噬菌体展示技术构建鸡DT40细胞cDNA T7噬菌体文库,明确了法氏囊活性肽与鸡B淋巴细胞相互作用蛋白,初步解析了法氏囊活性肽BS、BP5以及BPP-II对鸡B淋巴细胞的相互作用机制。

2.以骨髓干细胞和未成熟B细胞为模型,利用基因组和蛋白质组分析,结果证实,法氏囊活性肽BP5、BPP-II和BSP-II均明显促进B细胞的分化,促进pre-B和iMB/MB细胞的比例上升,初步阐明了法氏囊五肽BP5、BPP-II和BSP-II调节未成熟B细胞分化的分子基础和作用机制。

3.通过采用双相电泳和MALDI-TOF质谱相结合的方法,对新法氏囊活性肽BP5调节的抗氧化生物学过程进行了分析验证,并结合RNA干扰等技术证实了BP5对G6pdx活性的调节作用,揭示了新法氏囊活性肽BP5诱导未成熟B细胞中抗氧化机制。

4.法氏囊新分离活性肽BLP、BP5、BP-(I-IV)和BPP-(I-V)通过动物试验结果证实,BLP、BP5、BP-(I-IV)和BPP-(I-V)等生物活性肽配合灭活抗原AIV能显著提高抗体滴度,上调IFN-γ、IL-4水平、介导体液免疫和细胞免疫。动物免疫保护试验结果显示,法氏囊生物活性肽有助于鼠肺脏中H9N2型AIV的清除,具有良好的免疫佐剂活性。

5.该成果密切结合畜牧业生产实际,目标明确、技术路线合理、方法先进、资料翔实、结果可靠。经查新和鉴定委员会确认,该成果有关新分离法氏囊活性肽BLP、BP5、BP-(I-IV)和BPP-(I-V)等免疫生物学功能以及新型法氏囊生物活性肽作为新型免疫佐剂的开发具有创新性,在国内同类研究领域居领先水平。

四、应用范围:该研究成果主要应用于新型免疫佐剂的开发和动物疫病的防控。

五、推广情况:该研究成果分别在河南省郑州市、洛阳市、汝州市、焦作市、商丘市等20个县市的128个养殖场和动物疫病防控中心等单位进行了推广应用,经过近3年来的应用证明,该成果所制备的新型法氏囊生物活性肽等免疫佐剂,配合疫苗使用,安全性好,动物疫病防控效果非常显著,取得了巨大的经济和社会效益。完成单位和其他应用单位,近3年新增销售额11630万元,新增利润6325万元。该研究成果为河南动物疫病防控提供了新的途径,同时对保障河南养殖业的健康发展也有着重要的意义。

成果说明

本成果是在对新分离法氏囊活性肽BLP、BP5、BP-(I-IV)和BPP-(I-V)免疫生物学功能以及免疫调节机理深入研究基础上,面对当前河南省动物疫病防控现状,研发新型法氏囊生物活性肽作为新型免疫佐剂。并在河南省郑州市、洛阳市等地进行田间试验,受试鸡群约30余万只,通过鸡群3个月内跟踪调查,证明新型免疫佐剂联合疫苗免疫应用后,无任何不良反应,保护率可达99%以上。在实验室和田间试验的基础上,本成果在河南省20个县市中进行了大面积的推广应用,新型法氏囊生物活性肽联合疫苗免疫的鸡群和猪群进行了对比免疫观察。

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