《酶降解法制备低分子肝素钠》

1、项目关键技术内容:

①肝素酶制备技术:酶降解法制备低分子肝素钠所用的肝素酶产品主要是从肝素黄杆菌中肝素酶Ⅰ的分离而得。但国际利用此法得到的肝素酶产量低、纯化困难,造成酶的成本非常昂贵,也极大地限制了酶降解法制备低分子肝素钠的发展,而利用重组菌株生产肝素酶Ⅰ是一条极有前景的途径。该项目将研究制备并生产重组可溶肝素酶Ⅰ来制备低分子肝素钠。

②低分子肝素钠制备技术:该项目利用肝素酶降解法制备低分子肝素钠,对整个生产流程的每个环节加以研究以取得最优工艺路线。

采用的肝素酶能够特异的裂解肝素链上具有特殊结构的序列,从而获得目标寡糖片段。肝素酶作用的基本过程是使己糖胺和糖醛酸之间的键断裂,在非还原末端生产4,5-不饱和艾杜糖醛酸,该还原末端在230~235nm处有明显吸收,而此吸收值与降解产物中的肝素钠分子量有一定的关系,因此可以通过230nm处的吸收值来控制产品质量。肝素钠产品和肝素酶易于分离,生产方便,酶可反复使用,可节约成本。

利用固定化融合肝素酶和超滤膜分离法的联用为酶降解的工业应用提供了可靠途径,酶解反应条件控制简单,产物的分子量便于检测,能实现生产的自动化。

2、授权专利情况、技术经济指标:公司生产的低分子肝素钠,经过检测,平均分子量均<8000,分子量低于8000的大约占78.5%-88.5%,抗Xa活性均>70IU/mg,抗Xa活性/抗IIa活性比值均>1.5,细菌内毒素符合规定。完成了合同规定的全部技术指标项目在实施前中后,申请与该项目相关发明专利8项,获得8项发明专利授权。

3、项目应用推广及效益情况:肝素具有强抗凝作用,可制备成抗血栓药物、治疗心脑血管疾病药物,但大量使用,可引起过敏反应、出血和诱导血小板减少、骨质疏松和自发性骨折等副作用,大大限制了其在临床上应用。

低分子肝素钠是新一代肝素类抗血栓药物,由肝素钠原料药经化学或酶降解后生成的分子量在8000道尔顿以下的肝素片段,具有生物利用度高,体内半衰期长,出血倾向小,口服易吸收等特点。它可以克服肝素钠的一些副作用而仍保持其抗凝活性,因此是肝素的理想替代品。低分子肝素钠已成功的用于防止深部静脉血栓(DVT)、血液透析、心脏外科手术的体外循环和肝素诱导的血小板减少症。低分子肝素钠因其具有较高的药效和较低的副作用,在临床上得到了广泛的应用。在国际、国内市场上产品供不应求,市场前景非常广阔。

包括基于实现多功能化肝素酶的生产、分离纯化;低分子肝素钠制备新工艺的开发,并实现了中试和实际应用。根据相关成本初步核算低于化学法制备低分子肝素钠的工艺成本。通过和肝素钠、低分子肝素钠生产企业合作,推动酶法制备低分子肝素钠的发展。最终建立具有中国自主知识产权的酶法制备低分子肝素钠的新工艺,推动该领域的技术进步。

成果说明

我单位是肝素钠及低分子肝素钠制剂生产厂家,2015年8月购买了山东绅联生物科技有限公司酶降解法制备低分子肝素钠的技术。在产品使用过程中,性能稳定,收率高,未出现任何质量问题。通过本公司应用, 制剂产率提高了15%,大幅度降低了本公司生产成本,并且具有很强的推广性。

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