《旋毛虫病无诊断盲区免疫学检验与诊断方法的建立及其应用》

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旋毛虫病是一种危害非常严重的食源性人兽共患寄生虫病,是全球范围内生猪屠宰过程中唯一必须设立专门检验室的强制性必检病种,也是中国政府提出让人民吃上“放心肉”的猪肉必检病种(始自1956),仅年检验费用就高达107亿元人民币。中国有4500万人感染该病,低敏感性的传统检验技术即镜检与消化法,是造成高漏检率以致大量人体感染的重要原因。旋毛虫自发现至今已有179年的历史,然而时至今日现代免疫学技术仍无法应用于屠宰生猪的旋毛虫病检验,人旋毛虫病的早期诊断也只能采用活体采样和镜检。率先分离鉴定出了旋毛虫早期诊断抗原基因,建立起了旋毛虫病无诊断盲区免疫学检验与诊断方法,从根本上解决了所使用抗原存在诊断盲区的世界性难题。免疫学方法的敏感性是镜检与消化法的100倍以上,且费用仅为其1/10。然而由于目前可大量制备和实际应用的来自旋毛虫肌幼虫的排泄分泌物(ES)抗原存在严重的诊断盲区,即35天前无法检出,而旋毛虫在感染宿主后的第17天即可发育成为具有侵袭力的幼虫,致使免疫学方法无法应用于屠宰生猪旋毛虫病的检验及人旋毛虫病的早期诊断。该项目通过对109种候选抗原基因的筛选,在国际上率先分离鉴定出了旋毛虫病早期诊断抗原基因NBLSS2-1基因。基于该基因的表达抗原所建立的免疫学检验与诊断方法在宿主被感染12天后即可检出,从而使得免疫学方法应用于屠宰生猪旋毛虫病的检验以及人旋毛虫病的早期诊断成为可能。该技术除可大大降低中国屠宰生猪旋毛虫病的检验费用,在确保猪肉安全以及人民身体健康上具有更为重要的意义。该基因已申请了33个国家的专利保护,已获欧盟27国及美国的发明专利授权。发现了旋毛虫期特异性抗原基因表达的DNA甲基化调控机制,提供了旋毛虫病免疫预防和治疗的新目标分子与靶点。通过生物信息学、全基因组甲基化测序以及质谱分析,在国际上率先发现和证实了旋毛虫(线虫)DNA甲基化调控机制的存在。弥补了模式生物即秀丽隐杆线虫(C.elegans)缺乏该调控机制的缺憾,改写了线虫不存在DNA甲基化的经典(BMC期刊集团新闻评述)。鉴定的中国旋毛虫分离株获国际标准虫种认证与编码,结束了中国长期以来因使用随机分离株而造成的研究无标准性以及成果无通用性的局面,避免了人力与物力上的巨大浪费,同时为中国的相关研究提供了重要的实验材料。所建方法与试剂盒通过国家卫生部鉴定并应用于第二次“全国人体重要寄生虫病现状调査”、中国重要疫区如云南、河南等12个省市自治区人(21.29万人份)及屠宰生猪(22.36万头份)旋毛虫病的诊断与检验,以及法国屠宰生猪旋毛虫病的检验(1.10亿头份/8年)。所鉴定的国际标准虫种被应用于包括法国、美国等在内的国内外11家单位。基于以上成果主发明人先后当选国际旋毛虫病委员会副主席,WH0/FA0食源性寄生虫病专家委员会以及世界寄生虫学联合会(WFP)专家委员会委员,并出任0IE亚太区食源性寄生虫病协作中心负责人。

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