《猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪轮状病毒三联活疫苗创制与应用》

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生猪产业事关国计民生,是全面实现小康社会的重要支柱产业。猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒(PoRV)感染是哺乳仔猪死亡的“第一杀手”,7日龄以内仔猪感染死亡率可高达100%,每年经济损失超过100亿元。2010年后猪病毒性腹泻疫情再次爆发,使生猪产业遭受重创,引起我国政府高度关注。疫苗是防控该类疫病的最有效手段。针对我国这三种病毒混合感染日趋严重的现实问题,该项目组历经12年科学攻关,发明了我国首个安全高效猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪轮状病毒(G5型)三联活疫苗(以下简称猪病毒性腹泻三联活疫苗),攻克了三种病毒混合感染无疫苗可用的难题,实现了猪病毒性腹泻精准高效防控。主要发明创造如下:

1.发明了适应传代细胞系的安全性高、免疫原性好,具有独特分子标记的TGEV、PEDV和PoRV(G5型)弱毒株,攻克了三种猪腹泻病毒难以适应细胞、致弱过程中免疫原性减弱、强弱毒株难以区分的世界性难题。通过筛选敏感传代细胞系,优化添加胰酶、二甲基亚砜(DMSO)等辅助因子使病毒成功适应细胞。在病毒致弱过程中,采用敏感细胞系和未吃初乳仔猪交替继代,结合固相病毒蚀斑克隆及全基因组测序等技术,优选安全性高、免疫原性好的克隆株,独创了猪腹泻病毒分离致弱体系,发明了安全、稳定、免疫原性好并具有独特分子标记的TGEV华毒株、PEDV CV777株和PoRV G5型NX株三种弱毒株,为三联活疫苗的创制及产业化奠定了关键性基础。

2.创制了我国首个安全离效的猪病毒性腹泻三联活疫苗,主、被动免疫保护率分别高达96.15%和88.67%,实现了一针防三病。创建了传代细胞系替代原代细胞的生产新工艺,降低约2/3的生产成本,突破了原代细胞培养过程中外源病毒污染难以控制的技术瓶颈。制定了疫苗制造与检验规程及质量标准。利用发明的三种弱毒株及新工艺,创制了我国首个猪病毒性腹泻三联活疫苗,主动免疫保护率96.15%,被动免疫保护率88.67%,对哺乳仔猪、妊娠母猪在内的所有猪只均安全。该疫苗的发明填补了我国无猪病毒性腹泻三联活疫苗、无猪轮状病毒疫苗可用的空白,对单一感染与混合感染均有效,实现了一针防三病。

3.创立了与疫苗配套应用的检测和监测技术体系,实现了猪病毒性腹泻精准高效防控。根据疫苗毒株独特的分子标记,独创了与该疫苗完全匹配的强、弱毒株鉴别诊断方法,实现了疫苗株与野毒株的鉴别;建立了敏感特异的抗原、抗体检测和监测技术;制订了猪病毒性腹泻诊断行业标准;创立了以疫苗为核心、以诊断为支撑的猪病毒性腹泻精准高效防控技术体系。

获国家发明专利2项、国家二类新兽药证书1项,制订行业标准2项;获黑龙江省技术发明一等奖1项、中国专利优秀奖1项;发表文章81篇(SCI 23篇)。疫苗转让含4家上市公司在内的7家生产企业,金额1.10亿元。疫苗在全国累计应用2560万头份,免疫覆盖仔猪1.54亿头,实现销售收入2.01亿元。经测算经济效益为38.94亿元,社会生态效益显著。

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