主要研究内容及研究方法：主要研究内容：1筛选受Dicer调节的非编码RNA；2研究这些非编码RNA在不同病理组织及不同肝癌细胞系中的表达水平研究方法：1收集慢性乙型病毒性肝炎、肝硬化活检标本、HBV相关性肝细胞癌标本及正常肝组织，比较Dicer在这些标本中的表达差异。2比较不同肝癌细胞系及正常肝细胞系中Dicer的表达水平，研究Dicer表达水平是否与细胞的增殖、克隆形成及迁移等生物学特性具有相关性。3用solexa测序技术比较Dicer knockdown细胞以及对照细胞的转录组。4定量RT-PCR研究这些非编码RNA在大样本的慢性乙型病毒性肝炎、肝硬化、肝细胞癌及正常肝组织中的表达，阐明在不同病理组织中这些非编码RNA的表达水平是否与Dicer的表达水平存在相关性、是否与疾病进程存在相关性。5研究这些非编码RNA在不同肝癌细胞系中的表达水平，阐明在不同肝癌细胞系中这些非编码RNA的表达水平是否与Dicer的表达水平存在相关性、是否与细胞的增殖、克隆形成及迁移能力等具有相关性。6研究这些非编码RNA对细胞的增殖、凋亡和迁移等生物学特性的影响。7深入研究对细胞增殖、凋亡以及迁移有影响的几个非编码RNA在慢性乙型病毒性肝炎恶性转化过程中的作用机制。创新之处：1课题组发现Dicer在慢性乙型病毒性肝炎患者肝组织中的表达降低，提出炎症反应可能是慢性乙型病毒性肝炎患者肝组织中Dicer表达降低的原因，Dicer表达降低可能是慢性乙型病毒性肝炎恶性转化的重要原因之一，相关研究国内外尚无报道。2 7SL RNA是信号肽识别颗粒(signal recognition particle,SRP)的组成成分之一，参与细胞膜糖蛋白及分泌蛋白的跨膜转运，而细胞膜糖蛋白的表达与肿瘤发生发展密切相关。课题组最近发现7SL RNA能被Dicer切割生成不同长度的片段，这些7SL RNA片段能够抑制细胞膜糖蛋白的表达，因此可能参与肿瘤发生(见课题组的文章Ren et al,Plos One,2012；Ren et al,Plos One,2013)。3课题组发现miR-34a通过靶向Fra-1抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭能力。4课题组发现受HBsAg调节的miRNA在肝癌细胞中抑制主要组织相容复合物(MHC)I类分子相关基因A和B(MICA/B)的表达。MICA/B是天然免疫系统NKG2D受体的配体，主要表达在肿瘤细胞和一些病毒感染细胞的表面，在大多数正常细胞中不表达。NKG2D受体主要表达于自然杀伤(NK)细胞，CD8+T细胞和γδT细胞的表面。MICA/B与NKG2D受体结合后，能够诱导NK细胞及T细胞的杀伤活性。这些结果提示HBsAg能够通过对miRNA的表达调节来抑制天然免疫分子的表达，从而抑制机体的抗肿瘤免疫应答。研究结果的意义：Dicer是RNA干扰(RNAi)途径中的关键酶，参与ncRNA的表达调控：它是miRNA和siRNA生物合成过程中的关键酶；也参与lncRNA的代谢及表达调节。Dicer在很多肿瘤组织中表达降低，Dicer表达降低的肿瘤病人预后不佳。Sekine等发现在肝脏中敲除Dicer导致肿瘤发生。课题组的研究也表明，与癌旁正常肝组织相比，Dicer在大多数肝癌组织中表达降低。而且，与正常肝组织相比，Dicer在大多数慢性乙型病毒性肝炎病人肝组织中表达降低。这些结果提示Dicer表达降低可能与慢性乙型病毒性肝炎恶性转化密切相关。但是，在小鼠肝脏中敲除Dicer后,大部分肝细胞发生凋亡，只有极少数的细胞发展成为肿瘤，提示仅仅Dicer表达降低不足以诱发肿瘤，还需要“二次打击”才能形成肿瘤。课题组发现一些受Dicer调节的ncRNA在肿瘤发生发展过程中起重要作用,提示某些ncRNA异常表达可能是Dicer表达降低诱发肝癌的“二次打击”。课题组的结果表明受Dicer调节的ncRNA可能在慢性乙型肝炎恶性转化过程中起重要作用。学术界的反映、引用情况，以及转入其他科技计划的情况：课题组的文章发表后很短时间就有大量引用，说明课题组的发现学术界的关注。例如，课题组的carcinogenesis(Wu et al,2012)发表后1年多就有23次引用(根据google scholar)。在该项目资助下，该课题组获得4项国家自然科学基金资助，作为骨干参与艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项1项、863重大项目子课题一项。该项研究工作对研究小组、实验室或学科发展所起的作用：该项目是该课题组成立以来获得的第一个项目。在该项目资助下，该课题组获得4项国家自然科学基金资助，作为骨干参与艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项1项、863重大项目子课题一项。该项研究工作对培养博士生、硕士生的作用：在该项目及其他项目资助下，培养硕士研究生15名，已毕业5名，今年即将毕业5名。实际完成该课题的研究人员及作用唐开福：实验设计、指导助手和研究生日常工作、论文写作、参与少量实验。吴建民：完成两篇carcinogenesis文章中的大部分实验、协助PI指导学生。李桂玲：完成两篇Plos One文章中的部分实验、协助PI指导学生。施可庆：参与部分文章写作。任永峰：完成两篇Plos One文章中的大部分实验。对该省相关领域发展的建议建议该省在相关领域加大投入。

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