《上皮-间质和间质-上皮转化在口腔干细胞癌变中的作用》

目的:

口腔癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)是危害人类健康的常见恶性肿瘤之一,全世界每年约有30万的新发病例。上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition ,EMT)是指上皮细胞在外界因素的作用下,获得某些间充质细胞特征的现象,其在胚胎发育、创伤愈合、肿瘤的发生发展及侵袭转移等多种生理、病理过程中都具有重要的生物学作用。近年来,EMT与肿瘤预后的相关性逐渐为人们所认识:一方面,肿瘤细胞通过EMT能够获得更高的侵袭、转移能力。另一方面,发生了EMT的肿瘤细胞具有癌干细胞的某些特征(如增殖、分化、抗凋亡能力增强),从而使细胞对抗化疗药物的能力加强。因此,有学者提出EMT可能是决定肿瘤预后的“开关”。该研究通过建立口腔上皮细胞永生化细胞株的细胞模型,结合口腔鳞状细胞癌细胞系和口腔鳞状细胞癌组织标本,探讨EMT和逆向EMT即间质-上皮转化(mesenchymal-epithelial transition, MET)在口腔鳞状细胞癌生物学特性(复发、转移和干细胞性)中的作用。

方法:

1.该研究采用转化生长因子beta1(transforming growth factor beta 1, TGF-beta1)体外诱导口腔鳞癌细胞系SCC9,SCC15和SCC25,检测锌指蛋白(Snail和Slug)的相互作用对上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)和Western blots检测基质金属蛋白酶2和9(matrix metalloproteinases, MMP2/9)的表达改变。

2.该研究采用骨形成蛋白-4(bone morphogenetic protein-4,BMP4)体外诱导口腔鳞癌细胞系Tca8113,观察Tca8113细胞中干细胞特性的变化。逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR), Western blots,免疫荧光和免疫组化检测Tca8113细胞中和口腔鳞癌标本中干细胞标记OCT4, ABCG2的表达改变。

3.该研究采用人端粒酶逆转录酶human telomerase reverse transcriptase,hTERT)转染培养的正常口腔黏膜上皮细胞,获得hTERT+-OME永生化细胞系。二维贴壁和三维悬浮培养hTERT+-OME永生化细胞,观察EMT和MET在维持hTERT+-OME细胞干性中的作用。

4.该研究以HaCaT细胞为阴性对照,转染hTERT入HaCaT细胞,建立hTERT+-HaCaT细胞系。采用RNA干扰技术转染多梳基因BMI-1的干扰片段入hTERT+-OME和hTERT+-HaCaT永生化细胞,MTT法和体外瘤球实验观察BMI-1的表达对hTERT介导的细胞永生化和干细胞性的影响。

成果说明

郑州大学第一附属医院口腔颌面外一科方政副主任医师申报的2019年科技成果项目“上皮-间质转化和间质-上皮转化在口腔干细胞癌变中的作用”,经单位学术委员会评价,现将评价意见阐述如下: 该研究内容围绕EMT和MET双重作用致口腔黏膜上皮细胞获得干细胞特性与口腔癌发生、发展的关系展开。口腔癌(oralsquamouscellcarcinoma,OSCC)是危害人类健康的常见恶性肿瘤之一,全世界每年约有30万的新发病例。上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)

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