《复合抗原在活动性肺结核中的应用价值》

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1、长期以来,由于缺乏新型、有效的结核病早期、快速诊断技术一直是导致中国和大多数发展中国家结核病感染、传播和高死亡率的重要因素。与细菌学和分子生物学技术相比,免疫学诊断技术同时兼具简便、快速、价廉、无需贵重仪器、容易在基层实验室推广等优势,因此一直是重点关注的研究方向。结核病免疫学诊断分为两个类型:①依据机体对病原菌----结核分枝杆菌(MTB)诱发的免疫应答反应进行检测,又分为体液免疫检测和细胞免疫检测两个方面;②针对病原菌MTB的特异性抗原进行检测。由于机体受到MTB感染后,体内首先出现的是结核分枝杆菌特异性抗原,并且结核抗原的检测可以作为结核杆菌存在的直接证据,可以避免结核病患者由于免疫应答低下导致的体液免疫检测或细胞免疫检测的“假阴性”,因此检测结核分枝杆菌特异性抗原更有可能发展成为结核病早期、快速、敏感、特异,并且适宜在发展中国家推广应用的新型诊断方法,因而也越来越受到人们的重视。

2、在该课题中,该项目以结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA为模板,扩增Rv0315、Rv2991,回收PCR产物,将测序完全正确的菌落PCR产物所对应的质粒转化表达菌E. coli BL21(DE3)plysS。测序正确的克隆可进行表达与纯化。应用ELISPOT法检测IFN-γ释放水平。通过大样本病例分组,评估复合抗原Rv0315、Rv29912种在结核病早期、活动期和稳定期对血清中抗原的检出率,对这三个指标的检测结果组合分析,初步验证对结核病进行早期诊断,活动性判断和治疗效果评判的效果。为提高结核病医疗总体水平的,为控制和防治我结核病感染、传播而做出贡献。

3、首创一种可应用于活动性结核病跟踪诊疗的生物标志物组合,并结合该院优势对其临床应用进行初步评估。其分别在结核病早期、活动期和稳定期对血清中抗原具有较高的检出率,对这三个指标的检测结果组合分析,可以对结核病进行早期诊断,活动性判断和治疗效果评判。

4、该技术处于初级阶段,用于实验室研究,对结核病的具有一定的辅助诊断价值

5、由于经费有限,试验有待于扩大样本多中心研究。

成果说明

目前结核病诊断仍然依赖于过时的结核诊断工具,比如痰涂片、痰培养及胸部X线检查、这些方法敏感性及特异性较低,耗时,以至于患者错失了疾病早期干预的机会。为了降低发病率、死亡率及传播风险,对于疾病早期阶段准确诊断至关重要。近年来,结核诊断的发展已经得到了极大关注。对原有的诊断方法进行审查、改进,新的诊断方法得到发展和补充。本研究有望获得可以用于结核病诊断的标志物,克隆表达得到结核分枝杆菌特异性抗原Rv0315、Rv3615C、RV2991,评价结核分枝杆菌特异性抗原在体液免疫和细胞免疫诊断价值,检测其是否对于以

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