《猪附红细胞体病快速诊断及防治研究》

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我国养猪历史悠久,是畜牧业的重要组成部分,近年来,养猪业迅速发展,规模化、集约化的养猪场应运而生、不断壮大,已成为农村经济的支柱产业;但是近年来随着养猪业的迅速发展,猪的引种、品种改良和商品猪的交易性流动越来越大,导致传染病流行日趋严重,尤其是猪的附红细胞体病发病率亦呈上升趋势,给养猪业造成巨大的经济损失;附红细胞体病(Eperythrozoonsis)是一种人畜共患传染病,对人造成严重威胁。由于猪附红细胞体的诊断,目前国内尚没有较成熟的方法,大多采用传统的血液压片或血液涂片染色镜检,结合流行病学特点和临床症状进行诊断;其病原形态学诊断的准确率较低,假阳性反应较多。同时附红细胞体病是人畜共患传染病,且多呈隐性感染,因而人们对其危害性重视不够,易被忽视,为此研究建立一种特异性高、敏感性强的诊断方法,以便快捷方便准确地对该病进行诊断并对确诊的病猪进行治疗,筛选出有效的治疗药物,同时通过确诊治疗和流行病学调查制订出一套独特的综合性的防治措施就成为兽医疫病防治工作的当务之急。  主要技术性能指标:项目共进行了以下五方面的研究内容:  (一)山西省猪附红细胞体病流行病学调查:  (1)调查结果表明:猪附红细胞体的隐性感染率很高,尤其养猪户的感染率(79.8%)高于规模化猪场(60.2%)19.6个百分点,差异显著(P<0.05)。  (2)猪附红细胞体在猪群中感染率很高,而发病率较低,发病死亡的猪均有不同程度的继发感染,混合感染死亡数占总死亡率的83.33%。  (二)建立了猪附红细胞体病的间接荧光抗体(IFAT)诊断技术:  (1)荧光抗体最佳浓度的测定:各梯度稀释荧光抗体与1%标准阳性血清反应结果显示:荧光抗体在1:64时特异性荧光最强,非特异性荧光最弱。因此,选用1:64稀释度为荧光标记抗体的最佳稀释浓度;  (2)血清最佳浓度的测定:用1:64稀释度的荧光抗体分别与各梯度阳性血清反应,结果显示:血清稀释度在1:64时特异性荧光最强,非特异性荧光最弱。因此,选用1:64为标准阳性血清的最佳试验浓度。  (3)IFAT的特异性及敏感性检测:用包被抗原与猪弓形体阳性血清、猪蛔虫阳性血清、猪瘟阳性血清反应,结果均未看到荧光。抗原按1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256稀释,然后分别进行IFAT,结果抗原在1:256稀释度时(感染率约为3.5‰)仍能见到特异性荧光。  (4)用IFAT法检出猪附红细胞体隐性感染率为80.38%,较直接镜检63.1%,高出17.3个百分点,差异极显著(P<0.01)。而且IFAT方法简单、快速,阳性、阴性样本差别显著,特异性高,敏感性强,与其它病原体不存在交叉反应,因此是一种在猪附红细胞体病的诊断、流行病学调查、治疗效果检查等方面具有广泛的应用价值。  (三)猪附红细胞体电子显微镜下的形态学观察:  扫描电子显微镜4580倍观察猪附红细胞体的结果:被附红细胞体寄生的红细胞变形,细胞膜缺损或凹陷,细胞膜表面有大小不一的球形小体附着,并不进入细胞内,直径在0.2~1.5μm之间,也可见链球状、杆状附着于红细胞表面,被附红细胞体寄生的红细胞呈波浪改变;寄生部位在红细胞全域、中央或者边缘,也有游离于血浆中。透射电子显微镜12000倍观察:被附红细胞体寄生的红细胞无其原有的双凹形表面光滑的形态特点,附红细胞体附着于红细胞膜上,附着点有类似纤丝状物或颈状将两者连接。附红细胞体是一近似球形结构物,具有完整的形态,其边缘密度较大,中间密度小,整个虫体呈外包一层厚膜的球体,个别红细胞被寄生后出现空洞。总之电镜研究表明:有附红细胞体附着的猪红细胞表面结构改变形成皱褶、突起、凹陷等,红细胞膜缺损或者出现空洞,使红细胞膜内外渗透压发生改变,导致红细胞易肿胀、破裂,血液成份发生变化。  (四)猪附红细胞体病防治药物的研究:  通过试验得出结果:血平注射液是猪附红细胞体病的首选药物。血平注射液是贝尼尔的缓释剂型,安全性好,副作用小,药效维持时间长,适于防与治,用药期间没有发生重复感染  (五)猪附红细胞体病综合防治措施的确立  通过项目研究总结出一套以定期检测、早期诊断、及时隔离、药物防治、控制继发感染、提高猪群免疫力的一系列行之有效综合防治措施。  主要创新点:  (1).建立了猪附红细胞体病快速诊断技术,首次将特异性强、敏感、快捷的间接荧光抗体(IFAT)诊断技术应用于猪附红细胞体病的诊断,使诊断准确率提高11.2个百分点。  (2).项目研制的治疗猪附红细胞体病特效药物“血平注射液”,对猪附红细胞体治疗有效率达100%,药物安全性好、药效维持时间长,优于其它治疗药物。  (3).研究确立了定期检测、早期诊断、及时隔离、药物防治、控制继发感染、提高猪群免疫力的综合防治模式,具有独特性。  附红细胞体病是由附红细胞体感染而引起的人畜共患传染病,附红细胞体是条件致病微生物,常造成人畜的隐性感染,当人畜机体抵抗力强时,不表现任何临床症状,常被忽视,不引起人们的重视,给养猪业和人类的健康造成了潜在的威胁。当人畜处于某种应激状态免疫功能降低时,常造成疾病的暴发,给养猪业造成极大的经济损失,给人类健康造成极大的危害。通过该项目的研究,应用IFAT技术检测得知,我省猪群中附红细胞体的感染率为79.6%。通过采取综合性的防治措施使猪附红细胞体病的发病率降低15.0%左右,死亡率降低10%左右,仔猪成活率提高5.0%左右,同时降低了治疗成本。从2002年~2005年使用本研究技术在猪场推广应用后,猪场新增利润累积达258万元。我省按每年以765万头出栏计算,每年可创造79.6%×765×10%×135元/头×14.1%=1159.1万元的社会经济效益。该项目的研究不仅提高了养猪业的经济效益,促进了养猪业的发展,同时保证了人类的健康。  间接荧光抗体(IFAT)技术特异性高,敏感性强,与其它病原不存在交叉反应,快速、简单,阳性、阴性样本差别显著。猪附红细胞体病的诊断方法,检出率高、准确性大,在猪附红细胞体病的临床诊断、流行病学调查、治疗效果检查都具有广泛的应用价值。此方法已在全省的部分规模化猪场和养猪专业户中推广应用。通过IFAT定期检测,并采取综合防治措施,使猪附红细胞体的感染率显著降低,发病率明显减少,无由于附红细胞体病而死亡的发生,给养猪业带来了可观的经济效益,并且保证了人类的健康。因此该项目的研究推广应用前景很好。

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