《超抗原SEA基因克隆、载体构建及抗黑素瘤基因治疗研究》

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该课题用免疫基因治疗策略,用近十年时间探索超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A对恶性黑色素瘤的靶向杀伤作用,并进行了一系列深入研究。内容包括用普通PCR和降落PCR方法等方法克隆SEA基因全序列,克隆并构建SEA基因缺陷型腺病毒载体,在SEA基因全序列PCR扩增过程中先后加入两种DNA聚合酶,实现先用Pfu保真,后加Taq的聚A功能,将SEA全基因克隆入T载体,然后进行腺病毒载体穿梭质粒的包装;将超抗原SEA基因转染小鼠B16黑素瘤细胞,用RT-PCR和流式细胞等分子细胞学技术检测分析SEA基因在B16黑素瘤细胞中表达,将超抗原SEA基因转染C57BL/6小鼠淋巴细胞,检测分析SEA基因在淋巴细胞中表达,在体外观察淋巴细胞杀伤B16黑素瘤细胞作用,超抗原SEA诱导黑素瘤B16细胞凋亡作用等,并建立了B16黑素瘤小鼠模型等。这项研究为其他抗肿瘤细胞免疫机制中小片段多克隆激活剂的克隆和载体构建提供了重要的理论和实际应用依据。该课题成果的科学性、创新性、应用性都十分明显。

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