《细胞色素P4501B1与上皮性卵巢癌紫杉醇耐药研究》

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卵巢癌是预后最差的妇科恶性肿瘤,因其在发生转移时才出现非特异性症状,故70%以上患者诊断时已属晚期,卵巢癌对化疗药物的耐受也是预后差的原因之一。因此,寻找卵巢癌高易感的遗传标志、通过某些特异性高表达基因来预测化疗疗效、增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,对卵巢癌的早期预防、病因诊断、指导临床治疗有重要的意义。CYP(cytochrome P450)是体内重要的氧化还原酶系,可以催化众多的内源性物质(如类固醇激素)和外源性物质(如进入体内的药物),使药物失活增强。几种CYP酶通过启动或失活多种化疗药如紫杉醇、多西紫杉醇等而影响肿瘤对抗癌药的反应。CYP1B1是细胞色素P450超基因家族成员,被认为是多种癌症的候选致病基因,表达CYP1B1的细胞可能影响肿瘤细胞对抗癌制剂的敏感性。利用CYP1B1特异性抑制剂,逆转肿瘤对化疗药的耐药可能为一个新的逆转耐药的靶点。  研究内容:CYP1B1基因多态性与卵巢癌遗传易感性的关系;检测卵巢癌组织、卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织中CYP1B1的表达,为以CYP1B1为靶点进行卵巢癌治疗提供理论基础。观察卵巢上皮性癌细胞系中CYP1B1、Survivin、MDR-1、MRP-1基因表达与紫杉醇敏感性的关系。研究CYP1B1抑制剂ANF在体内外增强紫杉醇对卵巢癌耐药细胞的抗癌作用并探讨其机制。  研究方法:该课题以CYP1B1为靶点,从基因突变、组织学水平、细胞学水平、裸鼠模型建立等层面对卵巢癌易感性、紫杉醇耐药及逆转耐药等进行研究。  1、利用AS-PCR法对卵巢癌组和对照组进行CYP1B1等位基因分型;免疫组织化学法观察上皮性卵巢癌组、良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织进行CYP1B1蛋白表达。  2、培养卵巢癌细胞系及其紫杉醇耐药亚系A2780TS;MTT法测定卵巢癌细胞系中CYP1B1及临床上较为肯定的耐药相关基因mRNA表达水平与紫杉醇敏感性的细胞生长抑制率;RT-PCR和Western blot方法检测四种基因在在卵巢癌细胞系及其紫杉醇耐药亚系A2780TS的表达。  3、MTT法观察CYP1B1抑制剂ANF对紫杉醇耐药细胞A2780TS的耐药逆转作用;流式细胞仪分析不同处理后A2780TS细胞凋亡率及细胞周期的变化;RT-PCR、Western blot分析紫杉醇联合ANF作用后CYP1B1基因在各层面的表达变化,探讨逆转耐药的机制;建立A2780TS细胞裸鼠皮下移植瘤模型,动物体内实验观察ANF逆转紫杉醇耐药的作用。   1、用于肿瘤的早期预防:该课题探索研究了CYP1B1基因多态性与卵巢癌遗传易感性的关系,研究结果显示CYP1B1基因密码子432突变等位基因与卵巢癌的发生有一定关联,突变基因型增加了卵巢癌的发病风险,且与ER的表达相关。为卵巢癌及其它恶性肿瘤提供了一个高易感遗传标志,为肿瘤的遗传监控、早期预防提供新的靶点。  2、用于肿瘤的治疗:该课题通过检测卵巢癌组织、卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织中CYP1B1的表达,得出卵巢癌中CYP1B1阳性表达率明显高于卵巢良性肿瘤组织,正常卵巢组织CYP1B1呈阴性表达,为以CYP1B1为靶点进行卵巢癌治疗提供理论基础,CYP1B1可作为一个抗癌药开发的新靶点。  3、用于逆转化疗制剂耐药:该课题观察了卵巢上皮性癌细胞系中CYP1B1、Survivin、MDR-1、MRP-1基因表达与紫杉醇敏感性的关系。研究CYP1B1抑制剂ANF在体内外增强紫杉醇对卵巢癌耐药细胞的抗癌作用并探讨其机制。  研究结果显示:卵巢癌细胞系COC1、HO-8910PM、HO-8910、A2780、A2780TS中,CYP1B1、MDR-1基因mRNA表达水平与紫杉醇敏感性相关;耐药细胞亚株A2780TS中CYP1B1、Survivin基因的表达量高于A2780细胞;紫杉醇对4种细胞系中CYP1B1基因的调节作用不同。CYP1B1抑制剂ANF在体内外可增加紫杉醇对卵巢癌耐药细胞A2780TS的抗癌性,起到一定的逆转紫杉醇耐药的作用,ANF无明显的毒性副作用。

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