《猪多病原混合感染的基因诊断与高通量快速检测技术研究》

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针对该省猪病混合继发感染严重、病因复杂,确诊和防控困难的实际,项目组在省科技厅重点农业科研项目(2005C22032)的支持下开展相关研究。通过对生猪蓝耳病(PRRS)、猪瘟(CSF)、猪伪狂犬病(PR)、猪细小病毒病(PPV)、猪2型圆环病毒(PCV2)、猪乙型脑炎(EB)、猪流感(SI)等主要致病病毒序列的保守性分析,设计与合成核酸探针和引物,建立单PCR、多重PCR、荧光定量PCR及高通量基因芯片等适用快速诊断和流行病学调查的系列检测方法,并在大量临床样品检测验证和数据分析的基础上,集成了猪病快速检测高通量平台,对新病原确诊及分子流行病学研究提供与国内外领先技术同步的基因诊断系列方法。经查新,PCV1和PCV2鉴别的基因芯片技术建立等多项技术未见国内外报道。其中,“同时检测多种混合感染的方法”已申请发明专利一项并受理,培养硕士研究生2名,发表论文10篇(含SCI论文一篇)。该系列技术成功应用于主要猪病跟踪监测诊断与研究,明确近3年该省猪病地方性流行主要病毒性病原为PRRSV、CSFV和PCV2,已初步掌握该省流行CSFV的E2基因及PRRSV的ORF5基因变异情况与疫苗株的差异。特别是在2006年发生猪高热病暴发初期,通过疫情发生前后系统的病原学比对实验结合流行病学调查,迅速证实引起2006年中国猪高热病流行的主要病原为PRRSV,为中国特别是该省猪高热病防控和决策,及时采取针对性措施,减少损失,提供了重要技术依据,经查新,未见国内外报道。通过开展猪病基因诊断技术培训,使该省11个地市均有一个以上兽医实验室具备猪病分子生物学检测能力,已建立由20个重点监测县和10个猪病监测点组成全省性猪病监测网络,使该省兽医系统的整体检测能力提高到基因水平,步入全国领先行列。三年来,研究成果在杭州、宁波、嘉兴等地及省灯塔种猪有限公司等应用,明显提高猪病控制水平,减少了疫病损失,提高了生产性能,累计获经济效益1.29亿元。该技术对快速诊断生猪疫病、快速提升兽医诊断水平以及动物疫病预警等方面将有广泛的应用前景。

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