《HPV16感染对于宿主宫颈上皮细胞microRNA的影响及其作用机制》

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宫颈癌是妇女第二大恶性肿瘤,全国及该省均有新发病例增多、发病年轻化的趋势,对发病机制、早期诊断和治疗的研究提出了更多挑战。HPV16是最常见的HPV 感染型别,是宫颈癌发生的主要病因。前期研究中,HPV16感染对于宿主宫颈上皮细胞基因组中miRNA 表达产生影响,后者被认为在肿瘤发生发展及侵袭转移等多种过程中发挥了重要的作用。明确的HPV16相关miRNA 并未鉴定,HPV16影响miRNA 的作用机制更是不清楚。由于miRNA 一对多的调节方式,决定了其在肿瘤发病及治疗中的重要意义。该项目采用高通量技术筛选HPV16相关的miRNA,并成功鉴定出系列与HPV16感染相关的miRNA,并采用实时荧光定量PCR 进行验证。该项目应用基因工程技术,设计HPV16 E5、E6、E7 ShRNA 及HPV16 E5、E6、E7高表达载体以研究HPV16致癌蛋白对HPV16相关miRNA 的影响。HPV16 E5、E6、E7 ShRNA 转染SiHa 细胞以分别降低其HPV16 E5,E6,E7的表达;HPV16 E5、E6、E7高表达载体转染HeLa 细胞(文献表明HeLa 细胞为HPV18感染,但其HPV-DNA 整合基因组出现部分缺失,其中就包含E5缺失)。以上基因调控后测定miR-196a 表达实验结果表明HPV16 E5 表达抑制了宿主细胞中miR-196a 的表达,而敲除E5则可纠正此抑制作用,而miR-196a 表达与E6和E7并无联系。同样使用基因工程技术调节宫颈癌细胞系中miR196a 的表达,将化学合成的miR-196a mimic 及 miR-196a Inhibitor 分别转染至HPV16阳性、低表达miR-196a 的SiHa 细胞和HPV16阴性、高表达miR-196a 的HeLa 细胞,并通过测定细胞增殖、周期、凋亡、侵袭和转移确定miR196a 在宫颈癌发生发展中的作用。因此,该研究综合应用高通量技术、基因组学和蛋白质相互作用研究的方法,研究人乳头瘤病毒16型感染对于宿主宫颈上皮miRNA 表达及功能的影响并分析其机制,确定miR-196a 在HPV16感染早期即发生降低,并随着肿瘤的进展显示更显著的降低趋势,miR-196a 在宫颈癌细胞系中抑制细胞增殖、侵袭转移,并加快细胞凋亡,显示肿瘤抑制因子作用,其表达直接被HPV16 E5调控。因此可能是治疗HPV16感染及预防宫颈癌的潜在靶标。

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