《丹皮酚对单纯疱疹病毒性脑炎发病过程TLR2通路的干预作用机制研究》

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课题来源与背景:课题来源:广西自然科学基金项目(2013GXNSFAA019214)。背景:单纯疱疹病毒脑炎( HSE)是由单纯疱疹病毒引起的脑部炎症,HSE具有高病死率、病情严重等特点。HSV感染过程中大量促炎细胞因子的释放是导致大脑损伤的主要原因,Toll样受体介导的炎症反应在机体抗病毒感染过程中发挥重要作用,通过研究丹皮酚对TLR通路的干预作用机制,为临床治疗HSE提供新的途径。技术原理及性能指标:技术原理:该项目在建立HSV脑炎细胞模型基础上给予丹皮酚干预,观察丹皮酚对BV-2小胶质细胞TLR信号通路的直接影响,研究过程中发现丹皮酚对TLR2信号分子抑制作用不稳定而对TLR4信号分子抑制作用明显,观察小胶质细胞受病毒刺激的条件下丹皮酚对TLR4及下游主要信号分子(MyD88,P38,磷酸化P38,NF-κB, TNF-а,IL-6)等的影响;饲养Balb/c小鼠,通过颅内注射HSV-1制作小鼠HSE的模型,采用丹皮酚干预,检测TLR分子以及下游信号相关分子mRNA和蛋白的表达;探讨丹皮酚对TLR4通路的干预作用机制。性能指标:小胶质细胞系BV-2细胞接种HSV-1制造细胞模型,使用realtime- PCR技术检测HSV-1感染组与对照组TLR2、TLR3、TLR4、TLR9mRNA表达,细胞受HSV-1干预后,丹皮酚干预24小时,Westernblot检测TLR4、MyD88、P38、磷酸化P38、NF-κBp65蛋白表达;realtime- PCR检测TLR4、MyD88、P38mRNA表达;ELISA检测IL-6、TNF-α的表达。统计学方法:计量资料结果用均数±标准差表示,采用SPSS17.0统计软件进行统计学处理,多组样本均数之间的比较用方差分析和q检验,P<0.05为差异有统计学意义。技术的创造性与先进性:该项目研究发现Toll样受体参与了单纯疱疹病毒性脑炎的发病过程,尤其是TLR4信号通路参与HSV-1感染后免疫应答反应,小胶质细胞可能通过TLR4识别HSV-1,进而激活TLR4信号通路激活,引起TNF-α、IL-6的分泌;小鼠颅内接种HSV-1病毒可以建立一个稳定的小鼠HSE模型;该项目在国内外首次发现丹皮酚可通过抑制TLR4和下游信号因子抑制HSV-1感染后过多的炎性因子,丹皮酚可能对P38、NF-κB、TNF-α和IL-6有一定直接抑制作用或者通过Toll样受体间接产生抑制作用。较以往研究,该项目扩大了丹皮酚的研究领域。技术的成熟程度,适用范围和安全性:研究技术成熟,安全性好,该项目研究结果为单纯疱疹病毒性脑炎治疗提供新的理论基础,具有广阔的推广前景。应用情况及存在的问题:成果正在南宁市第二人民医院等三家医院应用,具有一定的经济效益和社会效益。

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