《构建荧光定量PCR法检测高发区肝癌TYMS基因及临床意义》

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PCR法检测TYMS基因,该方法操作简单快捷,特异性好,灵敏度高,用于各种肿瘤组织标本的,与免疫组化的相关性r=0.97。肝癌中TYMS的表达水平为43.8%。高发区TYMS与肿瘤大小、生存期相关性意义(p=0.05)。高发区肝癌TYMS与AFP、HBV-DNA的水平相关性意义。肝癌中TYMS中位值M=3.55×10<'4>copies/mL。发表《64例肝癌TYMS基因表达分析》国家级杂志《中国热带医学杂志》第10期。TYMS(胸苷酸合成酶)基因位于18号染色体短臂,包含有333个氨基酸,该人胸苷酸合成酶重组蛋白的N末端融合了一个20个氨基酸的His标签,其编码的TYMS是DNA合成的关键酶,在DNA合成与修复中起重要作用,是叶酸代谢循环中起中心作用的酶类之一,也是以5-氟尿嘧啶为基础化疗的靶酶。5-Fu在体内须转化为相应的核苷酸类似物才能发挥细胞毒作用,其主要机制为转化为一磷酸氟代脱氧尿苷,后者与TYMS、5,10-亚甲基四氢叶酸形成三联复合物,并抑制TYMS,阻碍dTMP的从头合成;并且以FdUTP和FUTP的形式掺入到DNA或RNA分子中,破坏其结构和功能。实时荧光定量PCR基因扩增技术构建原理:PCR反应体系中除有两条引物外还有一条标记探针。探针的5’端和3’端分别标记荧光报告基因R和荧光淬基因Q,当探针完整时R基因与Q基因分别位于探针的两端,Q基因抑制R基因使其不能发射荧光。PCR过程中,TaqDNA聚合酶同时还发挥其5’-3’外切核酸活性,将探针的脱氧核苷三磷酸逐个水解,R基团与Q基团随之分离。此时R基团不再受Q基团的抑制而发射荧光,仪器的检测系统便可测得荧光信号。R基团信号强弱与CR反应产物的拷贝数成正比,仪器的计算机软件系统根据标准曲线和反应产物量计算出初始模版的拷贝数。该项目主要研究TYMS基因在同安肝癌高发区原发性肝癌表达及临床意义。首先构建TYMS基因实时荧光定量PCR检测法,检测TYMS基因在原发性肝癌中的表达,分析TYMS与原发性肝癌临床病理特征的关系,为在全国原发性肝癌高发区(厦门同安区)寻找敏感而特异的原发性肝癌早期诊断标志,为基因治疗药物靶标寻找提供重要线索和依据。

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