“人体表皮干细胞体外培养”课题是为解决大面积特重度烧伤病人，全身皮肤坏死，生理屏障破坏的创面修复的皮源问题，应用人体表皮干细胞体外培养、移植覆盖创面，是救治的大面积特重度烧伤病人生命具有发展前途的治疗方法之一。课题组应用病人的正常包皮或少量正常皮肤，经过实验室的消毒清洗分离后，将所得表皮通过酶的作用，分解成细胞团块，过筛后将干细胞悬液按种培养皿内放入CO<,2>培养箱培养，每2天更换一次培养液，显微镜下观察细胞形态，当细胞扩展达80%时可以传代。将原代细胞分解成细胞悬液(即第2代细胞悬液)接种于脱细胞真皮基质上，采用气-液界面培养的，使种子细胞定置在脱细胞真皮基质上完成复合皮培养。在此过程中加入400-500mg/L浓度的“积雪苷”制剂促进人表皮干细胞克隆、生长、扩展。能提前3天形成上皮细胞膜。第1代培养能使1平方厘米表皮可收获2×106以上，经第2至3代培养能后所得膜片面积可增加数十至数百倍，应用1%面积的皮片可以培育出100%以上面积的皮片，能够满足临床移植使用。“人体表皮干细胞"培养、传代、制成复合皮的成功得出如下结论：1.培养方法的改进，改变以往的含血清培养液完全浸入式培养法，而课题组采用先进的无血清培养液，非完全浸入式的气-液界面培养的方法，减少了血清中有害细胞生长的因素，促进细胞形成膜片的时间短，排除了异种蛋白的影响，气-液介界面培养法，能使表皮细胞大部分暴露在空气中(但不能完全暴露在空气中，以免细胞干枯雕亡)，近似生理条件，得到充分的分化，最终形成具有表皮和类似真皮结构的皮肤，移植后达到长期存活的目的，该方法培养的表皮细胞角化程度大，具有半桥粒和基底膜结构，类似正常真皮结构。2.培养技术的提高：将500mg/L浓度“积雪甙”制剂加入第2代细胞培养液中，能促人表皮干细胞克隆、生长、扩展，能提前3天形成上皮细胞膜。3.将表皮干细胞(2代细胞)直接传代于人脱细胞真皮基质上，形成复合皮，使移植更方便，成活后功能完好，不易破溃较单纯表皮细胞膜效果更好。该项目完成研究报告2篇分别发表在中华级和国家级杂志上：1.《浅谈表皮干细胞培养传代于脱细胞真皮基质所形成的复合皮的体会》刊登于中华损伤和修复杂志，2009年12月第4卷，第六期，44-45。2.《积雪甙促进人表皮干细胞克隆和分裂作用的研究》刊登在中国中医药科技杂志，2010年11月第17卷，第六期496。该研究主要创新点：11.应用先进的无血清培养剂DK-STM培养液。2.将积雪甙制剂应用在传代细胞培养液内促进细胞分裂和生长。3.将干细胞传代于人脱细胞真皮基质，形成类似正常皮肤结构的复合皮。4.应用气-液界面培养方法将人表皮干细胞传代于人脱细胞真皮基质。经文献检索，国内尚无类似报道，国外减少报道，选题较新，属前沿热门课题，具有较高的临床实用价值。

1. 下载详细PDF版/Doc版

提示：为方便大家复制编辑，博主已将PDF文件制作为Word/Doc格式文件。