《表1 siRNA序列:DUSP6通过负向调控ERK1/2通路抑制IBV的增值》

《表1 siRNA序列:DUSP6通过负向调控ERK1/2通路抑制IBV的增值》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《DUSP6通过负向调控ERK1/2通路抑制IBV的增值》


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将H1299细胞按照5×105个孔接种于6孔板,培养至细胞密度达到60%时进行siRNA转染试验。取两个EP管分别加入250μL的Opti-MEM培养基,其中一个加入5μL的转染试剂Lipofectamine 2000,另一个EP管加入5μL 20 mmol/L的siRNA,室温静置5 min。将上述两管轻柔混匀,室温静置20 min,形成siRNA/Lipofectamine 2000复合物。预先铺好细胞的6孔板用预冷的PBS清洗3遍,每孔加入1 mLOpti-MEM培养基,并将siRNA Lipofectamine 2000复合物加入到6孔板中,混匀,置于37℃、5%CO2培养箱培养4 h后弃上清,加入含1%FBS的RPMI1640培养基继续培养32 h,收取蛋白样品,采用Western blot检测相应蛋白的表达情况以确定干扰效果。