《表1 Real-time PCR引物序列》

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《GPC3-WNT-JNK通路介导脂多糖诱导肺局部细胞炎症》

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不同浓度LPS（0.1、1、5μg/m L）刺激人肺上皮细胞16HBE细胞不同时间（0.5、4、12、24 h）后，加入1 mL TRIzol（每106个细胞加1 mL），裂解反应10 min，加1 mL的三氯甲烷溶液，4℃、12 000 r/min离心15 min，吸取400μL的上层水相层溶液与等体积的异丙醇混合后，静置10 min，4℃、12 000 r/min离心15 min，弃上清，用75%的乙醇溶液洗涤2次后，在室温下自然晾干，用紫外分光光度计检测提取的RNA的浓度及纯度。Realtime PCR检测GPC3、TGF-β和TNF-α表达，程序为94℃预变性5 min；94℃变性20 s、58℃退火30 s、72℃延伸2 min，40个循环；72℃延伸5 min。引物序列见表1。以GAPDH为内参照，2-ΔΔCt法计算GPC3、TGF-β和TNF-α的mRNA表达水平。