《表1 抗体信息:阿尔茨海默病患者红细胞膜蛋白表达的变化》

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《阿尔茨海默病患者红细胞膜蛋白表达的变化》


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从青海省人民医院获取所有检测者的全血样本,血样储存于乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid,EDTA)管中,4℃运输至青海省血液中心进行流式细胞仪分析。实验方法参照Palasuwan等人的研究[16,17]。简言之,用含有1%多聚甲醛的磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer solution,PBS)将50 L人全血样本稀释至4 m L,37℃固定5 min。1000×g离心5 min,弃去上清液,将沉淀重悬于150 L PBS溶液中,加入1 g/m L WGA-Alexa Fluor-647和一抗,37℃染色40 min。一抗的名称及使用浓度见表1。PBS洗2次,加二抗,二抗为藻红蛋白标记的山羊抗人二抗(Goat F(ab')2 Anti-Human Ig G-Fc(PE),稀释倍数为1:100),二抗购自英国Abcam公司。4℃放置30 min。PBS洗1次,加入0.5 m L PBS,过滤网上机。Ig G2为同型对照。根据前向散射(forward scattering,FSC)和侧向散射(lateral scattering,SSC)参数分离RBC。测量3次,取平均值。相对抗体表达用一抗和二抗检测的平均荧光值除以用同型对照和二抗检测的平均荧光值来表示。