《表2 微生物基因工程菌全细胞催化转化人参皂苷》

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《人参皂苷单体定向转化的生物催化及应用进展》


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“→”represents one-step reaction;“→→”represents more than one-step reactions;“/”represents data not mentioned.

在三萜合成途径构建方面,以酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae为代表的微生物工程已被广泛用于人参皂苷的转化[33-34](表2)。经鉴定Cyt P450酶(CYP716A47)参与达玛烷型人参皂苷前体达玛烯二醇-II C-12位羟基化,Han等[35]通过在S.cerevisiae中CYP716A47和达玛烯二醇合酶基因(PgDDS)的共表达,不添加达玛烯二醇-II即可产生PPD。Dai等在S.cerevisiae中引入达玛烯二醇-II合成酶、PPD合成酶基因以及拟南芥NADPH-细胞色素P450还原酶(ATR1)基因,并通过过量表达截短(Truncation)的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶、法呢基二磷酸合成酶、角鲨烯合成酶和2,3-氧化角鲨烯合成酶基因,以及提高PPD合酶活性的密码子优化,最后通过双相萃取发酵获得8.40 mg/g DCW PPD(1 189 mg/L)。Zhao等通过引入人参达玛烯二醇-II合成酶、人参细胞色素P450型PPD合成酶(PPDS)和拟南芥ATR1基因,在S.cerevisiae中构建了PPD的生物合成途径,经细胞色素P450氧化系统优化,在5 L生物反应器中补料分批发酵,PPD产量达到1 436.6 mg/L。