《表1 本研究所用引物：小麦TaXTH-7A基因的克隆及抗旱性鉴定》

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《小麦TaXTH-7A基因的克隆及抗旱性鉴定》

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TaXTH:小麦木葡聚糖内转糖苷酶；下划线部分为酶切位点的序列

采用Trizol法提取小白麦幼苗的基因组总RNA，再用FastQuant RT Kit（with gDNase）反转录试剂盒将RNA反转录成cDNA单链，得到的cDNA作为后续PCR克隆的模板。用Oligo7.0设计引物TaXTH-7A-F/R（表1），cDNA作为模板，进行PCR克隆该基因的cDNA序列。配置50μL的PCR体系为：模板（100 ng/μL）1.2μL、2×PrimerSTAR GC Buffer 25μL、dNTP Mixture（2.5 mmol/L）4μL、上下游引物（10 mmol/L）各1μL、Primer STAR 0.5μL、ddH2O 15.5μL。设置PCR反应程序：（95℃3 min）×1；（94℃30 s；57℃30 s；72℃55 s）×35；（72℃10 min）×1。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测，确定电泳条带与预期条带大小一致后，将电泳条带切胶回收，并将该回收产物连接至pZERO-Blunt零背景克隆载体（天根，北京）。连接产物转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞里，37℃倒置过夜培养，挑取单菌落在含氨苄抗生素的液体培养基于摇床培养约3 h后，进行PCR鉴定。配置20μL的PCR体系：模板（单菌落菌液）1μL、上、下游引物（10 mmol/L）各1μL、2×Taq Mixture 10μL、ddH2O 7μL。经琼脂糖凝胶电泳检测，将与预期片段大小一致的菌液送到奥科（杨凌）公司进行测序。