《表2 18对微卫星的引物信息》

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《改则县2个牦牛遗传资源群体评估》

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参考联合国粮农组织（FAO）和国际动物遗传学会（ISAG）联合推荐的引物，本研究选取了其中18对SSR引物，并在引物序列上游5′端加上FAM等荧光标记，以便检测。将引物进行组合扩增，并对PCR过程进行优化，荧光标记，获得PCR产物。所用引物和片段大小见表2。采用20μL PCR反应体系，其中各组分的终浓度分别为dNTPs 0.2 mmol/L、Mg2+1.5 mmol/L、混合上下游引物0.5 mmol/L、Taq酶5 U/μL、DNA模板1μL（约60 ng）。PCR反应程序为94℃预变性5 min；94℃变性30 s，50～60℃退火30 s，72℃延伸30 s，经过35个循环；于72℃延伸7 min，4℃保存。PCR产物采用8%聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测分析。PCR产物用ABI 3130 xl全自动基因分析仪进行分型检测。